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Text File  |  1996-02-27  |  3KB  |  45 lines
  1.        Document 0110
  2.  DOCN  M9630110
  3.  TI    Directed integration of viral DNA mediated by fusion proteins consisting
  4.        of human immunodeficiency virus type 1 integrase and Escherichia coli
  5.        LexA protein.
  6.  DT    9603
  7.  AU    Goulaouic H; Chow SA; Department of Molecular and Medical Pharmacology,
  8.        UCLA School of; Medicine 90095, USA.
  9.  SO    J Virol. 1996 Jan;70(1):37-46. Unique Identifier : AIDSLINE MED/96099411
  10.  AB    We tested whether the selection of target sites can be manipulated by
  11.        fusing retroviral integrase with a sequence-specific DNA-binding
  12.        protein. A hybrid protein that has the Escherichia coli LexA protein
  13.        fused to the C terminus of the human immunodeficiency virus type 1
  14.        integrase was constructed. The fusion protein, IN1-288/LA, retained the
  15.        catalytic activities in vitro of the wild-type human immunodeficiency
  16.        virus type 1 integrase (WT IN). Using an in vitro integration assay that
  17.        included multiple DNA fragment as the target DNA, we found that
  18.        IN1-288/LA preferentially integrated viral DNA into the fragment
  19.        containing a DNA sequence specifically bound by LexA protein. No bias
  20.        was observed when the LexA-binding sequence was absent, when the fusion
  21.        protein was replaced by WT IN, or when LexA protein was added in the
  22.        reaction containing IN1-288/LA. A majority of the integration events
  23.        mediated by IN1-288/LA occurred within 30 bp of DNA flanking the
  24.        LexA-binding sequence. The specificity toward the LexA-binding sequence
  25.        and the distribution and frequency of target site usage were unchanged
  26.        when the integrase component of the fusion protein was replaced with a
  27.        variant containing a truncation at the N or C terminus or both,
  28.        suggesting that the domain involved in target site selection resides in
  29.        the central core region of integrase. The integration bias observed with
  30.        the integrase-LexA hybrid shows that one effective means of altering the
  31.        selection of DNA sites for integration is by fusing integrase to a
  32.        sequence-specific DNA-binding protein.
  33.  DE    Bacterial Proteins/GENETICS/*METABOLISM  Base Sequence  Binding Sites
  34.        DNA Nucleotidyltransferases/GENETICS/*METABOLISM  DNA-Binding
  35.        Proteins/GENETICS/*METABOLISM  DNA, Viral/METABOLISM  Escherichia
  36.        coli/*METABOLISM  Feasibility Studies  Human  HIV-1/*ENZYMOLOGY
  37.        Molecular Sequence Data  Recombinant Fusion Proteins/GENETICS/METABOLISM
  38.        Substrate Specificity  Support, Non-U.S. Gov't  Support, U.S. Gov't,
  39.        Non-P.H.S.  Support, U.S. Gov't, P.H.S.  Virus Integration/*GENETICS
  40.        JOURNAL ARTICLE
  41.  
  42.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  43.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  44.  
  45.